استخلاص وتنقية الكومارينات (Archangelicin ) من جذور نبات حشيشة الملاك و دراسة تأثيرها ضد بكتريا Helicobacter المسببة لقرحة وسرطان المعدة

سؤدد عبد الإله محمد *, غادة عبد الخالق حسون , منتهى حرجان عليوي , إيمان محمد كاظم،اسيل طارق جواد

مركز بحوث التطبيقات الصناعية وتكنولوجيا المواد – قسم بحوث وتكنولوجيا كيمياء المواد الطبية والصيدلانية – هيئة البحث العلمي – وزارة التعليم العالي

البريد الالكتروني للباحث: Swddalbasy@gmail.com

009647702964968

الخلاصة

عشبة حشيشة الملاك (Angelica) تتبع الفصيلة الخيمية تتميز بأوراقها المسننة وأزهارها البيضاء , تسمى بهذا الاسم لأنها ذات فوائد ومنافع كثيرة , وهي غنية بالعديد من الفيتامينات مثل فيتامين B₁₂ والعناصر مثل الحديد والزنك وتحتوي على الكثير من المواد الفعالة ، مثل الزيوت الطيارة والقلويدات والفلافونيدات والكومارينات . تعتبر العشبة من النباتات الطبية المهمة وتساهم في علاج العديد من الامراض وبدورها مضادة للميكروبات و خاصة البكتريا والفطريات و تعالج التهابات المعدة والأمعاء وقرحة المعدة وتساعد على منع انتشار الأورام السرطانية .

الهدف من البحث هو استخلاص وتنقية الكومارينات وتشخيص مادة (Archangelicin) من جذور نبات حشيشة  الملاك ودراسة الفعالية التثبيطية ضد بكتريا Helicobacter pylori المسببة لقرحة وسرطان المعدة وتم استخدام عدة تراكيز من مستخلص الكومارينات (1000,500,250,125) ملغرام / مللتر(mg/ml), والاستخلاص بواسطة الكحول الاثيلي تركيز 80% , و حامض الخليك 5% اما تشخيص المادة الفعالة فقد تم بواسط جهاز HPLC . والكشف عن الكومارينات استخدمت قاعدة هيدروكسيد الصوديوم NaOH  1% , لملاحظة اللون البني من ورقة الترشيح للمستخلص المائي للنبات دلالة على الكشف الموجب .

وشخصت مادة (Archangelicin ) عند زمن احتجاز (3.7) دقيقة وطول موجي (265 Nm)  مقارنة مع المحلول القياسي . اما الفحوصات البايولوجية فاستخدمت طريقة الحفر (A gar well diffusion ) .

اجريت التجربة على 10 عزلات من بكتريا المعدة لملاحظة العزلات الحساسة والمقاومة للمستخلص النباتي و كانت اعلى منطقة تثبيط للعزلة (2) تساوي (32mm) ملمترعند التركيز 1000 ملغرام / مللتر(mg/ml), اما قيم MIC كانت تتراوح بين 250-500 mg/ml

الكلمات المفتاحية : نبات حشيشة الملاك , الكومارينات , بكتريا المعدة , سرطان المعدة .

Extraction and Purification of Coumarins (Archangelicin) from Angelica Roots and Study of Their Effects Against Helicobacter Pylori, the Cause of Stomach Ulcers and Cancer

*Suadad Abdul-Elah Mohammad, Ghada Abdel-Khalek Hasson Al-Kattan, Muntaha Harjan Eleoy, Eman Mohammad Kadem,Aseel T.Jawad

*Industrial Applications and Materials Technology Research Center – Medical and Pharmaceutical Chemistry Research and Technology Department

Scientific Research Authority – Ministry of Higher Education

Email: Swddalbasy@gmail.com

Abstract

Angelica (Angelica) belongs to the Apiaceae family and is characterized by its serrated leaves and white flowers. It is so named because of its many benefits. It is rich in many vitamins, such as vitamin B12, and elements such as iron and zinc, and contains many active ingredients. Such as volatile oils, alkaloids, flavonoids, and coumarins, the herb is considered an important medicinal plant and contributes to the treatment of many diseases. It has antimicrobial properties, especially against bacteria and fungi, and treats gastritis, intestinal infections, and stomach ulcers. It also helps prevent the spread of cancerous tumors.

The aim of this research was to extract and purify coumarins and identify the substance (Archangelicin) from the roots of the Angelica plant. It also studied its inhibitory activity against Helicobacter pylori, a bacterium that causes stomach ulcers and cancer. Several concentrations of coumarin extract (1000, 500, 250, and 125) mg/ml were used. Extraction was performed using 80% ethyl alcohol and 5% acetic acid. Identification of the active ingredient was performed using HPLC.

To detect coumarins, a 1% sodium hydroxide base (NaOH) was used. The brown color of the filter paper of the aqueous extract of the plant was observed, indicating a positive detection.

Archangelicin was identified at a retention time of 3.7 minutes and a wavelength of 265 Nm compared to the standard solution. Biological tests used the A-gab well diffusion method. The experiment was conducted on 10 isolates of gastric bacteria, observing the isolates sensitive and resistant to the plant extract. The highest inhibition zone for isolate (2) was 32 ml at a concentration of 1000 mg/ml, while the MIC values ​​ranged between 250-500 mg/ml.

Keywords: Angelica plant, coumarins, stomach bacteria, stomach cancer.

المقدمة

نبات حشيشة الملاك  Angelica جنس نباتي يتبع الفصيلة الخيمية وهي عشبة من اصول صينية  تتميز بأوراقها المسننة وازهارها البيضاء هذه النبتة تزهر و تتفتح في اوائل الصيف حتى نهايته (Armanak,K2006) وهناك 10 انواع مثل Angelica sinensis  , Ang. Dahurica , Ang.pubescens, , Ang. glauca , Ang. archangelica , Ang. adzharica .

ومعظم انواعه دو فوائد عديدة مثل تنشيط الدورة الدموية و مضادات الالتهابات ومضاد للاورام و مضاد للاكسدة و مضاد للميكروبات و يعتبر النوع Ang. sinensis  منظم للهرمونات ويعالج امراض الحيض (Zhuoli etal,2025)  .ويستعمل كمطهر للامعاء ويمنع حدوث القرحة المعدية ويمنع انتشار الاورام الليفية في الرحم والاورام السرطانية و يعمل على حماية الكبد و تقويته .ويعالج هشاشة العظام و تساقط الشعر وهناك الكثير من المواد الفعالة في هدا النبات مثل الكومارينات و الفلافونيدات والزيوت الطيارة  (EI-Sabew et al,2022) ,) 2022(Acimov,Ic, .

وتعتبر الكومارينات هي المصدر الاساسي للخصائص الطبية و الصيدلانية في النبات وتعرف انها مواد عطرية من فئة البنزوبايرين Benzopyron  , و هناك الكثير من النباتات لها رائحة عطرية مميزة بسبب احتوائها على الكومارينات مثل الفانيلا والدارسين والليمون وقد نشرت في السنوات الاخيرة بعض البحوث التي تخص طرق الاستخلاص و تقنيات الكروموتوغرافيا مثل استخلاص وتشخيص انواع عديدة من الكومارينات مثل Furocoumarins  و Angllicin  و الطريقة المفضلة للاستخلاص هي بالموجات فوق الصوتية (ultrasound-assist) والمذيب المفضل هو الكحول الاثيلي او المثيلي او خلات الاثيل

(Cafeo et al,2024) .

وقد تم التركيز في البحث على تأثير الكومارينات الموجودة في نبات حشيشة الملاك ضد بكتريا المعدة Helicobacter pylori  المسببة لقرحة المعدة و سرطان المعدة هده البكتريا حلزونية الشكل وسالبة لصبغة كرام تعيش وتتكاثر في الجدران المبطنة للمعدة و تعيش في ظروف قليلة الهواء microaerophilic  (Abu-Garbia, etal,2022) تنتقل للانسان عن طريق الاطعمة او المياه الملوثة و تصيب البكتريا الانسجة الواقية المبطنة للمعدة ويؤدي افراز السموم و بعض الانزيمات الى حدوث التهاب مزمن في المعدة و يؤدي الى سرطان المعدة . تنتشر بكتريا المعدة انتشارا واسعا ما يقارب 50% من السكان وقد زادت مقاومة هذه البكتريا للمضادات الحيوية لدلك لجأ بعض الباحثين لاستعمال النباتات الطبية كعلاج بديل , وذلك لاحتوائها على مواد فعالة كثيرة مثل القلويدات و الصابونيات و الكومارينات و الفلافونيدات والزيوت الطيارة. ميكانيكية عمل هذه المواد تعمل على تثبيط انزيم Urease  الذي تفرزه بكتريا H.pyiori  أو تحطيم الغشاء الخلوي للبكتيريا أو تعتبر مواد مضادة للالتصاق او تمنع التصاق البكتيريا بجدران المعدة، ومن هذه النباتات الكركم بسبب وجود curcumin  والزيوت الطيارة في الليمون والنعناع . و تعتبر مواد مضادة للبكتيريا و مضادة للأكسدة تخلص الجسم من الجذور الحرة السامة (Abou Buker,2020) والهدف من البحث هو دراسة تأثير الكومارينات المستخلصة من جذور نبات حشيشة الملاك ضد بكتيريا المعدة H.pylori المسببة لقرحة وسرطان المعدة حيث يشكل هذا السرطان خطورة كبيرة ويعتبر من السرطانات المهمة في العالم و يؤدي الى الوفاة ، لذلك هناك محاولة لايجاد علاج بديل عن المضادات الحيوية وهو النبات لتقليل الاصابة بالسرطان عن طريق كبح البكتيريا .

• أهمية البحث : ایجاد عقار نباتي من نبات حشيشة الملاك لعلاج قرحة المعدة المتسبية عن بكتريا

1. pylori .

• مشكلة البحث :محاولة إيجاد الفعالية التثبيطية من مستخلص الكومارينات جذور نبات حشيشة الملاك

ضد بكتريا المعدة  H.pylori المسببة لقرحة وسرطان المعدة .

• منهجية البحث : عملية الكشف عن المادة الفعالة (الكومارينات) وإستخلاصها وتشخيصها بواسطة جهاز HPLC أي تشخيص مركب (Anchangelicin) ثم عمل تراكيز مختلفة من المستخلص النباتي 1000 ، 500 ، 250 ،  125 ملغرام / مللتر (mg/ml) لدراسة تأثير هذا المستخلص بطريقة الحفر ضد بكتريا  pylori لعشر عزلات ومعرفة العزلات المقاومة والحساسة للمستخلص عن طريق قياس قطر منطقة التثبيط وتحديد التركيز المثبط الادنى MIC ثم تحليل البيانات وبيان الفروق المعنوية أم غير المعنوية حول تأثير المستخلص على الغزلات البكتيرية بطريقة التحليل الاحصائي (ANOVA).
• حدود البحث :تم إجراء البحث في مركز بحوث التطبيقات الصناعية وتكنولوجيا المواد – قسم بحوث وتكنولوجيا كيمياء المواد الطبية والصيدلانية – هيئة البحث العلمي- وزارة التعليم العالي .
• تاريخ العمل : تشرين أول – 2024 الى تشرين اول – 2025.
• فروض البحث : نفرض ان جميع المواد الفعالة في نبات حشيشة الملاك تمتلك فعالية تثبيطية ضد البكتريا وخاصة بكتريا المعدةpylori وقد تم التركيز على المادة الفعالة (الكومارينات) باعتبارها من المواد المهمة طبياً والفعالة في تثبيط الجراثيم ومواد مضادة للسرطان.
• الدراسات السابقة : تعتبر الكومارينات من المواد المهمة طبياً وخاصة في نبات حشيشة الملاك. وتعتبر مضادة للبكتريا الموجبة gram + ve والبكتريا السالبة لصبغة كرام  gram- ve  وبعض الفطريات مثل الكانديدا Widelski et al , 2009)  Candida albicans )

كما تعتبر الكومارينات مضادة للتخثر ومضادة للسرطان مثل سرطان الرئة والكبد والثدي

( 2023 Flores et al, )

• الهدف من البحث

الكشف والاستخلاص للمادة الفعالة الكومارينات مركب Anchangelicin) ) من جذور نبات حشيشة الملاك ودراسة تأثيرها ضد بكتريا المعدة H.pylori المسببة لقرحة وسرطان المعدة.

المواد وطرق العمل

1. النبات : تم الحصول على جذور نبات حشيشة الملاك من السوق المحلية وتم تشخيص الجذور بالاعتماد على موسوعة( Encyclopedia of life ,2013) تم طحن الجدور المجففة بشكل مسحوق ويحفظ في اكياس نايلون لحين الاستعمال .
2. المواد الكيميائية : تم الحصول على الكحول الاثيلي Ethanol بتركيز 80% و حامض الخليك بتركيز 5% من مختبرات ابحاث كيمياء المواد الطبية والصيدلانية و كدلك القاعدة هيدروكسيد الصوديوم NaOH .
3. الاوساط الزرعية : تم الحصول على الاوساط الزرعية Muller Hinton agar و Brucella agar  المصنع من شركة LAB من السوق المحلية .
4. الاجهزة المختبرية : استخدم جهاز المبخر الدوار Rotary Evaporater من شركة (Heidolf) للتخلص من السائل والفرن Oven  شركة (GSC) لتجفيف المستخلص السائل بدرجة حرارة 40 م˚ وجهاز الكروموتوغرافيا السائل HPLC  ذو الضغط الفائق من شركة (Shimazo) لغرض تشخيص المادة الفعالة )الكومارينات Archangeillcin  ( .
5. العزلات البكتيرية : تم الحصول على 10 عزلات بكتيرية من بكتريا المعدة Helicabacter من مرضى مصابين بقرحة المعدة من احدى المختبرات الاهلية في الحارثية في العاصمة بغداد
6. الكشف عن الكومارينات : يتم تحضير مستخلص مائي من نبات حشيشة الملاك يوضع 5 غرام) (g في 100 مللتر (ml) من الماء المقطر . ويترك يغلي لمدة 10 دقائق ويؤخد الراشح ويوضع في انبوبة اختبار مغطاة بورقة ترشيح مرطبة بمحلول قاعدة هيدروكسيد الصوديوم المخفف 1% بعد 5 دقائق نلاحظ ظهور لون بني على ورقة الترشيح دلالة على وجود الكومارينات و ممكن ملاحظتها بشكل واضح بعد تعرض ورقة الترشيح للاشعة فوق البنفسجية (Bello,2018)  .
7. استخلاص الكومارينات : يوضع مسحوق جذور نبات حشيشة الملاك بمقدار 10 غرام (g) في100 مللتر (ml) من الكحول الاثيلي Ethanol تركيز 80% لمدة يومين 48 ساعة مع التحريك المستمر ثم يرشح بواسطة شاش طبي معقم وبعدها بورقة ترشيح واتمان رقم (1) يتم بتبخير السائل بواسطة جهاز المبخر الدوار بدرجة حرارة 40 م˚ لحين الحصول على السائل كثيف القوام ثم يوضع بالفرن بدرجة حرارة 40 م˚ وبعد التجفيف يضاف اليه ماء مقطر محمض بحاض الخليك بتركيز 5% ويترك لمدة 5 ساعات ثم يرشح مرة اخرى ويخفف بالفرن مرة اخرى لحين الحصول على المستخلص الجاف ويوزن بواسطة ميزان حساس ويقدر الوزن بالغرامg  او مليغرام  mg (Bourgad et al,1994) ويمكن تحضير عدة تراكيز من التركيز الاصلي (1000mg/ml) واستخدمت التخافيف النصفية لغرض الحصول على التراكيز 500,250,125 ملغرام /مل mg/ml) ).
8. طريقة فحص حساسية البكتريا للمستخلص المائي ) الفحوصات البيولوجية( : استخدمت طريقة الحفر (Ager well diffusion) لغرض فحص حساسية البكتريا للمستخلص النباتي وضعت في كل حفرة 3 ml من المستخلص لغرض ملاحظة منطقة التثبيط و حفرة السيطرة ماء مقطر وكان تركيز العالق البكتيري 10⁶ خلية / مليلتر و بعد فترة حضانة 24 ساعة في درجة حرارة 37˚ م تم حساب منطقة التثبيط بالمسطرة مقدرة بالمليمتر mm))  حول كل حفرة ) قطر الحفرة 6 مليمتر (mm ( . (Arya et al,2021)
9. تشخيص المادة الفعالة (Archangellicin) (الكشف الكمي) : تم تشخيص المادة الفعالة بواسطة جهاز (HPLC) و اجريت المقارنة مع محلول قياسي Standard عند زمن احتجاز Retention time  (3.7 دقيقة) وطول موجي (265 Nm) واستخدم العمود (250X4.6ID)mm وتم حساب تركيز المادة الفعالة حسب المعادلة التالية : تركيز العينة = تركيز المحلول القياسي x مساحة العينة ÷ مساحة المحلول القياسي .
10. التحليل الاحصائي : حللت النتائج المستمدة من التجارب لبيان تأثير المستخلص النباتي على العزلات البكتيرية بطريقة (ANOVA) عند مستوى احتمالية 5% ودلك لتقييم النتائج من حيث الفروق معنوية ام غير معنوية للمستخلص النباتي .

النتائج والمناقشة

يبين الشكل (1) ظهور اللون البني الاصفر على ورقة الترشيح عند اضافة الكاشف القاعدة هيدروكسيد الصوديوم المخفف 1%  دلالة على كشف الموجب للكومارينات .

شكل (1) ظهور اللون البني الاصفر في ورقة الترشيح للمستخلص المائي لنبات حشيشة الملاك عند اضافة الكاشف القاعدة NaOH دلالة على الكشف الموجب .

اما الشكل (2) يوضح ظهور المادة الفعالة Archangellicin عند زمن احتجاز(3.7) دقيقة مقارنة مع المحلول القياسي عند استخدام جهاز (HPLC) بطول موجي (265 Nm) وكان تركيز المادة الفعالة (2ppm)

شكل (2) ظهور المادة الفعالة Archangellicin  عند زمن احتجاز 3.7 في جهاز HPLC للمستخلص النباتي (الكومارينات).

اما جدول (1) يمثل قطر منطقة التثبيط بالمليمتر mm للمستخلص النباتي ضد بكتيريا المعدة

Helicobacter pylori ) 10 عزلات ( . والمعاملة بعدة تراكيز من المستخلص النباتي (1000,500,250,125) ملغرام / مللتر  mg/ml والرقم 6 يشير الى عدم وجود منطقة تثبيط حول الحفرة والسيطرة ماء مقطر والشكل (3) يوضح ان منطقة التثبيط تزداد بزيادة التركيز (تناسب طردي)

جدول (1) قطر منطقة التثبيط بالملمتر mm لعشر عزلات من بكتيريا H.pylori والمعاملة بعدة تراكيز من المستخلص النباتي

الحروف المتشابهة تعني عدم وجود فروق معنوية والحروف المختلفة تعني وجود فروق معنوية عند مستوى احتمالية 0.05

H₁ وH₂ وH₃ ارقام العزلات

شكل (3) مخطط يوضح زيادة مناطق التثبيط بزيادة التراكيز (تناسب طردي)

يتضح من الجدول ان اعلى منطقة تثبيط كانت للعزلة رقم 2 وتساوي 32 ملمتر واقل منطقة تثبيط كانت للعزلة رقم (6) وتساوي 20 ملمترمن بكتيريا H.pylori عند تركيز (1000mg/ml)  و تفاوتت قيمة MIC  بين العزلات حيث ان

والعزلة (1) كانت قيمة MIcتساوي (250mg/ml) ، العزلة (2) كانت تساوي(250mg/ml ) العزلة (3) كانت تساوي(250mg/ml)   و العزلة  (4)كانت تساوي  (250mg/ml)والعزلة (5) كانت تساوي (250mg/ml)   والعزلة (6) كانت تساوي (500mg/ml)والعزلة (7) كانت تساوي           (500mg/ml)  والعزلة (8) كانت تساوي (250mg/ml)والعزلة (9)كانت تساوي (250mg/ml)            العزلة (10) كانت تساوي mg/ml)   500) كما موضح في شكل (4)

وكان هناك تفاوت من حيث الحساسية والمقاومة للمستخلص النباتي بين العزلات العشرة للبكتيريا مثلا كانت العزلة رقم (1) حساسة للمستخلص النباتي بينما العزلة رقم (6) مقاومة للمستخلص النباتي .

ان الاستخدامات العشوائية للمضادات الحيوية ادت الى ظهور سلالات مقاومة من البكتيريا بالاضافة الى سمية للكبد . وهناك استخدامات كثيرة للنباتات الطبية مثل نبات حشيشة الملاك الصيني Angelica sinensis  حيث تم التحري  عن الفعالية التثبيطية للنبات ضد البكتيريا الموجبة لصبغة كرام gram+ ve والسالبة لصبغة كرام gram- ve  والمقاومة للمضادات الحيوية وتم خلط المستخلص النباتي مع الدقائق النانوية للفضة . AgNps وكانت قيمة MIC    100-5 Mg/ml  ويعطي هذا النبات حماية لخلايا الكبد Hep.G_2..Cell  بنسبة  85% في تركيز 100Mg/ml (Afthab et al.2020) .

ان جنس Angelica  يحتوي على الكثير من المواد الفعالة مثل الكومارينات والفلافونيدات وتعتبر هذه المواد مضادة للاكسدة و مضادة للالتهابات و مضادة للمايكروبات ومن الاجناس المهمة طبيا

A.daurica  (El-saber et al,2022)  .

وهناك نوع اخر A.glauca  حيث درست الفعالية التثبيطية لهدا النبات ضد مجموعة من العزلات البكتيرية مثل Staphylococcus aureuas   و Streptococcus pneumornia  و ،Klebsiella pneumonia   المسببة للالتهابات التنفسية ووجد ان المستخلص الميثانولي للجذور قد اعطى منطقة تثبيط  30-11 ملمتر(mm) وقيمة MIC  (3.12-25 mg/ml) ضد جميع العزلات البكتيرية

(Arya et al,2021) . ان بكتيريا المعدة H,pylori تؤدي الى الالتهابات و تقرح المعدة و سرطان المعدة خاصة ادا كانت الاصابة قديمة لكن بعض المركبات الطبيعية المشتقة من النبات مثل الكومارينات والفلافونيدات تلعب دورا مهما كمواد مضادة للبكتيريا . H.pylori ومضادة للالتهابات ومضادة للاكسدة (Chen et al,2025) و بالرغم من ان العلاج بالتشعيع يؤدي الى تقليل الاصابة بالسرطان لكن المنتجات الطبيعية النباتية تعطى لكبح بكتيريا المعدة داخل او خارج الخلية وتعمل هذه المنتجات الطبيعية ضد البكتيريا H.pylori  المقاومة والحساسة للمضادات الحيوية مثل هذه النباتات الثوم والتفاح والزنجبيل (Wang et al,2020)

وتعتبر الكومارينات : من المصادر الاساسية لنبات حشيشة الملاك لما لها من اهمية طبية وتم التحري عن خمس انواع منها في نوع A.lucida  وهي : imperatorin  و isoimperatorin  و heraclenol و ieraclenin  و oxypeucedanin وبعد الاستخلاص و تشخيص المركبات قيمت الفعالية ضد المايكروبات لستة عزلات  من البكتيريا الموجبة و السالبة لصبغة كرام , اثنين من العزلات ممرضة للفم و ثلاثة منها فطريات ممرضة للانسان وتشمل :

(Staph coccus mutams ,E.coli , Staph eidermidis, Pseudomonas aerugingsa , mutans, Candida.glabrata, Streptococcus viridians ,Candida tropicalis and Candida albicans )

وكانت قيمة MIC تساوي 3.4mg/ml ضد بكتيريا Staph aureus لمستخلص الايثر

(Widelski et al,2009) وتعتبر الكومارينات مضادة للتخثر ومضادة للسرطان مثل سرطان الثدي والرئة والكبد والكلية (Flores et al.2023) .

وممكن ان تكون المركبات الطبيعية النباتية داعمه  للجلد وتحميه من البكتريا المسببة للالتهابات

(Fialova et al,2021) . وتعتبر الفلافونيدات ايضا من المواد المهمة طبيا و ممكن ان تكون علاج بديل عن المضادات الحيوية و توفر حماية للانسان من السرطان و بعض الالتهابات . ان ميكانيكية عمل هده المواد تعمل على تثبيط انزيم urease  وتثبيط تصنيع البروتين وعوامل الالتصاق للبكتيريا H.pylori  في خلية المضيف ) معدة الانسان ( .(Rego et al,2022) .

واحد الدراسات تشير ان عشبة حشيشة الملاك تحتوي على الزيوت الطيارة التي تعمل على تثبيط بكتيريا Pseudomonous fluorescens  عن طريق تحطيم الغشاء الخلوي و جدار الخلية و كانت قيمة MIC  12.5ML/ml  وقيمة MBC تساوي 25 ML/ml  ويعتبر الزيت مادة حافظة للحوم و لحوم الاسماك .(Yuan et al,2024) و دراسة اخرى اكدت ان الزيت الموجود في Angelica sylverstis هو زيت Limonene و -pinene  –

وقد اعطي فعالية مضادة للبكتيريا الممرضة للانسان بقيمة MIC 0.11mg/ml  وقيمة MBC 54 mg/ml  وعندما نخلط المضاد الحيوي مع الزيت يعطي حالة تأزر و تقل قيمة MIC وتقل الاعراض الجانبية للمضاد الحيوي (Stankovic,etal,2020) .

وهناك بحث عراقي عن نبات حشيشة الملاك Angelica gluca  يهدف الى استخدام الدقائق النانوية للفضة AgNps . مع المستخلص الكحولي للنبات ويثبط البكتيريا بصورة اكبر مما لوكان المستخلص الكحولي لوحده (Qasim Abid,2023)  .

وهناك بعض الفطريات الممرضة لنبات حشيشة الملاك مثل فطر Fusarium  وممكن ان تتواجد في التربة بكتيريا Bacillus tequilensis  قرب جذر النبات وتكون مثبطة للفطر و كانت نسبة التثبيط 61-77%  .(Zhang etal,2023) .

و توجد ايضا بكتيريا Proteobacteria  في منطقة الجذر في التربة التي ينمو فيها نبات حشيشة الملاك Angelica dahurica  هذه البكتيريا تساهم في تحديد نوعية النبات و تحديد مادة germ plasm  وتزيد من كمية البوتاسيوم في التربة بأعتباره عنصر غذائي مهم للنبات .(Jiang,etal,2023) وان هذا النوع A.dahurica  مضاد للميكروبات و مضاد للاكسدة و الالتهابات والسرطان و في احد البحوث درست الفعالية التأزرية بين المستخلص الكحولي الايثانولي و المضاد الحيوي Ampcillin  و Gentamycin  في تثبيط البكتيريا Streptococcus mutans  المسببة لالتهاب الفم و حددت قيم التركيز المثبط الادنى MIC  والتركيز القاتل الادنى MBC  لكل من المستخلص الكحولي النباتي و المضادات الحيوية وكانت MIC  تساوي  62.5-1000Mg/ml  و MBC تساوي 250-2000Mg/ml للمستخلص الكحولي . حالة التأزر زادت من معدل قتل الخلايا البكتيرية عن طريق قياس عدد المستعمرات .CFU/ml

(Cha  et al,2020)

ودراسة اخرى تشير ان الفطر Altenaria  عند مزجه مع نبات حشيشة الملاك يمتلك فعالية تثبيطية عالية ضد البكتريا الممرضة للانسان مثل Pseudomonos aruginosa   و

 Streptococccus pneumoniae  وحددت قيمة MIC حيث كانت تساوي 25 Mg/ml

Zhang  et al, 2022) (.

كما درست الفعالية التثبيطية للمستخلص الكحولي الايثانولي لنبات حشيشة الملاك .Angelica gigaz ضد البكتيريا الموجودة في الفم Streptococcus mutans  وكانت هده البكتيريا حساسة للمستخلص بتركيز 5mg/ml .(Jeong,2024) .

وفي بحث أخر من مصر درست الفعالية التثبيطية للمستخلص المائي لنبات حشيشة الملاك A.archangelica ضد بكتيريا Pseudomonos aeruginosa  وقد تمت التجربة على الفئران بعد تقسيمها الى مجاميع مجموعة تشرب الماء فقط ومجموعة اخرى مصابة بالبكتريا تشرب من المستخلص المائي للنبات لمدة اسبوعين وبعد اجراء الفحص النسيجي للكلية والكبد للفئران و كذلك عينات الدم لاجراء الفحوصات البايوكيميائية و قياس ضغط الاوكسجين تبين ان المستخلص المائي لجذر هذا النبات يعمل على ازالة الضغط الاوكسجيني الدي تسببه البكتيريا و هناك فروق معنوية بين المجموعتين من حيث الفحوصات البايوكميائية و الفحوصات النسيجية (Ibrahim  et al,2020)

كما درست فعالية المستخلص المائي لنبات A.dahurica  على الفئران في علاج الجروح المتسببة عن بكتريا S.auraus و P.aeruginosa والعلاج مرة واحدة في اليوم لمدة اسبوع و لوحظ ان المجموعة المصابة بالجروح والتي اخذت المستخلص المائي بواسطة مسح منطقة الجرح قد تم  شفاؤها ولوحظ ان الخلايا الالتهابية cytokines  تناقصت اعدادها بعد اخد العلاج   (Yang et al ,2020)

ودرست الفعالية المضادة للميكروبات و المكونات الكيميائية لنباتي Melissa و Angelica وحدد الفعالية التثبيطية للمستخلصات المائية والكحولية للنباتين ضد بكتيريا E.coli   وKlebsiella  و S.aureus وضد خميرة Candida albicans  و تمت المقارنة مع المضاد الحيوي Gentamycin  للبكتيريا و Fluconazole للفطريات أو الخميرة .

اهم المكونات الكيميائية للنباتين هي القلويدات والفينولات و الفلافونيدات و كان المستخلص الكحولي والمائي لنبات Melissa اكثر تثبيطا ضد بكتيريا E.coli  ولم يثبط الخميرة Candida  والمستخلص المائي لنبات حشيشة الملاك كان مثبطا لبكتيريا S.aureus  بصورة رئيسية

(Saleh et al,2023) .

الاستنتاجات:

بعد اجراء التجارب حول تأثير المادة الفعالة ) الكومارينات ( في المستخلص الكحولي لجدور نبات حشيشة الملاك تبين انه يمتلك فعالية تثبيطية ضد بكتيريا H.pylori المسببة لقرحة و سرطان المعدة وكانت اعلى منطقة تثبيط(32 mm)  للعزلة رقم (2) وقيمة MIC تراوحت بين

(500-250) mg/ml لجميع العزلات وقد تفاوتت الحساسية والمقاومة بين العزلات البكتيرية العشرة .

التوصيات :

يوصى بأجراء تجارب اخرى عن المواد الفعالة ) القلويدات و الفلافونيدات و الفينولات والزيوت الطيارة ( والمقارنة بينها من حيث الفعالية التثبيطية ضد بكتيريا المعدة H.pylori لغرض تحضير علاج مثالي لقرحة وسرطان المعدة.

المصادر:

• Abou Baker , D.(2020). Plants against Helicobacter pylori to combat resistance : Anthenopharma cological review . Rep,21(26):e00470
• Abu-Garbia, M. ; Agban, M.N, Hamouda, A.M.A.; Abdel masieh , R.Z.(2021).Effect of some medical plant Extracts on multidrug resistant Helicobacter pylori : Strains isolated from Sohag and Assiut university Hospitais and some medical Laboratory .Journal of medical microbiology (EJMM),30(4):65-73.
• Acimovic,M. ;Rat,M.;Pezo,L. ;Loncar,B., etal. (2022). Biological and chemical of divertsity of Angelica archangelica –case study of Essentioal oil and its Biological Activity .Agronomy, 12(7):1570
• Afthab,J. ; Khatoon , N. ; Zhou, L.; Yao, T. and Shi, S. (2020). Hepataprotective Angelica sinensis silver nanoformulation against multidrug resistant bacteria and the integration of amulticomponent logic gate system Nanoscale , 12(37):19149-19158
• Armank,K.B.(2006)Illustrated Dictionary of Plant Names. Economic, medicinal, poisonous, and ornamental plants, as well as the most important weeds and herbs.Cairo, Madbouly Library, p. 62OCLC: 929657095,QID: Q117464906
• Arya;P.; mehta, J.P;Maurya, V.K (2021).Methanolic Extract of Angelica glauca Edgew root and stem :Apossibie component of herbal  medicines  against respiratory infections. Ind . j. pharm.Edu. Res ,55(2):552
• Bello, A. (2018).Phytochemical detection of active ingredients in the Syrian medicinal plant Tribulus terrestris (Zygophyllaceae).Syrian Journal of Agricultural Research (SJAR). 5(4):166-178.
• Bourgad, F; Poutaraud. , A. and Guckert, A(1994). Extraction of coumarins from plant material (Leguminocae). phyt.Anu,5(127):132
• Cafeo,G.; Irrea,E.; Russo, M.andDugo,P. (2024).Extraction and chromatogara Phic Approaches for coumarins, Furo coumarin and polymethoxy flavones  characterizationin foods. Foods,13(16):2517
• Cha, S.; Lee, K. Y., choi, S., Hun,J.and Cha ,J.(2021).Antimicrobioal activity of Anglica dahuric Ethanol Extract Against oral Bactteria . Journal of oral Dental (JODH), ISSN : 2573-8224 / Dol: 10.33140/ Impact Factor : 1.5 JODH, 5:24-31
• Chen, D. ;Wang ,W. ; Chen X. ; Liang , N., etal (2025). Plant derived extracts or compounds for Helicobacter a ssociated gastritis : asystematic review of their anti-Helicobacter activity and anti- inflammatory effect in animal experiments Chines Medicine , 20(53):1708
• El-sabew,G. ; Shaheen ,H.M. ;El-Hawary, E.A ;Mostafa, N.M ;Eidahshan , O.A and Subatier ,J.M.(2022).Phtyochemical constituents ,Folk Medicinal uses and Biological Activities of genus Angelica Areview Molecules,28(1):267
• Fialova,S.B.; Rende Kova , K.; Mucaji, P.; Nagy, M. and Slobodni Kova, L.(2021).Antibacterial activity of medicinal plants and their constituents in the context of skin and wound infections considering European legislation and folk medicine Areview Int. J.Mol.Sci.22(19):10746
• Flores ,V. ; Ruiz, P.V. Ana ;M.; Veloz, U, et al.(2023)Therapeutic Effect of Coumarin with different substitution patterns.J.Mol,28(5):2413
• Ibrahim , F.A.; Abd El-Latif ,N.A, Selim, M. and Mohammed. ,S.S.(2020).Angelica archangelica extract ameliorates the oxidative stress induced by Pseudomonos aeruginosa in rat Authors J.Inno .pharm. Biol. Sci, 7(4):1-12
• Jeong, S. J. (2024).Anti-oral Microbial Effect of Ethanol Extract of Angelica giga Korean: society of Dental Hygiene Science.(J. Dent Hyg Sci), 24(1):54-61.
• Jiang ,M.;Yao,F.;Yang, Y.Zhou, Y. etal.(2023). Analyisis of the from different the rhizosphere bacterial diversity of Angelica dahurica formosana from defifferent expermental sietes. And Varities. (strains).peer J,11:e15997, Doi: 10.7717/peerj.15997
• Qasim, Z.S. and Abid, K.Y.(2023). The Antibacterial activity of Angelica glauca in form of silver nanoparticles Iraqi J.Pharm. SCI,32(3):49-155
• Rego, A.; Silvestre, G. ; Melo, D.F. and Albino, S.L. (2022).Flavonoids- Rich plant extracts prevention to gastric cancer. Front pharmacol , V(13),https;//dio.org/10.338.fphar. 2022. 951125
• Saleh ,R.H; Omran, A.M; Bash, H.S.(2023)Chemical composition and antimicrobioal effect Melissa officinalis and Angelica sylvestris on selected microbial pathogens. Biodl versitas,24(3):153.
• Stankovic, N. ; Krstev, T.M; Zlatkovic, B.; Jovanovic ,V.S.(2020).Antibacterial and Antioxidant activity of wild – growing Angelica Species (Apiaceaceae)from Bulkan peninsula against human Pathogenic bacterial J.Ess.Oil.Res, 32(5):190
• Wang , L. ; Echeveste ,C.E.; Yu, J . ;Huang ,etal.(2020).Can Natural products suppress resistant Helicobacter pylori to Fight Against Gastric diseases in human ?Food ,1(1):53-60
• Widelski , J.; Popava, M.; Graikou,K. (2009).Comarims from Angelica lucida . L Antibacterial Activities . Molecules, 14(8).2729-2734.
• Yang, W.T.; Ke, C.Y.; Wu, W.T,Tseng, Y.H and Lee, R.P.(2020).Antimicrobial and anti- inflammatory potential of Angelica dahurica and Rheum officinale extract accelerates wound healing in Staphylococcus aureus infected . wounds sci. , 10:5596, https:// doi.org/10.1038
• Yuan, P.; He, Y.;Ma; Y.Chen,S.,etal ;(2024)Antibacterial activity of Angelica essential oil , its mechanism against pseudomonas fluorescens ; and its application in the preservation of chilled fresh beef .Food. Bio, 60:104273
• Zhang ,X. ;Guo, S. ;Wang ,w.(2020) Diversity and Bioactivity of Endophytes from Angelica Sinensis in China Front Microbiol , 11:1489.doi : 10.3389/frmcb.2020.01489.
• Zhang, P.; Zhang, W. wang , X.: Kou, Z. etal .(2023). Isolation and Identification of antagonistic bacteria of Angelica root and their mechanism as biological control . Con ,177:105120.
• ZhouLi,X.; Miaoxu, M.; Nanxu,H.;Zeli, Y.etal.(2025). Reseasch: progress of coumarins in the Genus Angelica. Chemi Biod, wiley –VHCA AG , Zurich Switzerland .p:1-27o:c00751, https , //doi.org/10.1002/cbdv.202500751